Журнал «Медицина неотложных состояний» Том 18, №6, 2022
Вернуться к номеру
Вплив флавоноїдних препаратів Протефлазід і Протойл на експресію гена транскрипційного фактора NRF-2 при вірусних інфекціях
Авторы: Архипова М.А. (1, 2), Дерябін О.М. (1), Трохимчук Т.Ю. (1), Старосила Д.Б. (1), Атаманюк В.П. (3), Завелевич М.П. (4), Рибалко С.Л. (1)
(1) — ДУ «Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського НАМН України», м. Київ, Україна
(2) — Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут ім. Ігоря Сікорського», м. Київ, Україна
(3) — Науково-виробнича компанія «Екофарм», м. Київ, Україна
(4) — Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України,
м. Київ, Україна
Рубрики: Медицина неотложных состояний
Разделы: Медицинские форумы
Версия для печати
Вступ. На сьогодні агенти вірусної природи є причиною значного відсотка патологічних станів від загальної кількості інфекційних хвороб. Оскільки віруси використовують різні стратегії уникнення впливу імунної системи організму хазяїна, для них характерні різні шляхи реалізації інфекційності, тому більшість противірусних засобів є вузькоспецифічними й можуть застосовуватись лише щодо обмеженої групи патогенів. Тому пошук противірусних засобів не обмежується колом препаратів з ефективною безпосередньою противірусною дією. Велике значення має пошук терапевтичних агентів, які мають здатність неспецифічно регулювати діяльність імунної системи з метою виправлення розладів, викликаних різними інфекційними агентами, стимулювати необхідні реакції, що перешкоджають розвитку невигідних для організму-хазяїна наслідків інфекції. До таких механізмів належить уроджений імунітет, що забезпечує механізми, які запобігають розпізнаванню специфічних патогенів, таких як віруси. При вродженій імунній відповіді перша лінія оборони забезпечується епітеліальними клітинами дихальної системи. Активація транскрипційного фактора NF-κB у клітинах хазяїна викликає індукцію цитокінів і хемокінів, надпродукція яких викликає рекрутинг імунних клітин в альвеолярний простір і оксидативно-нітрозативно-опосередковані пошкодження в тканинах легень. Тому регуляція активності ядерного транскрипційного фактора NF-κB, як нової мішені для створення антивірусних препаратів, є актуальною проблемою.
Мета — визначення впливу флавоноїдів препарату Протефлазід і субстанції Протойл на рівень експресії гена NrF-2 у легеневій тканині інтактних та інфікованих вірусом грипу A/FM/1/47/H1N1 мишей.
Матеріали та методи. Були проведені дослідження щодо визначення гена NrF-2 методом ПЛР. Для цього із суспензії легеневої тканини мишей виділяли мРНК за допомогою набору «Рібо-Сорб» згідно з інструкцією виробника («АмпліСенс», РФ). Реакцію зворотної транскрипції виконували за допомогою набору Revertaid TMH Minus First Strand з DNA Syntesis Kit (Termo Scientific, Литва). Для ПЛР були використані спеціальні праймери до гена NrF-2 і Кеар-1 миші. Дослідження виконані методом ЗТ-ПЛР з візуалізацією продукту ампліфікації шляхом електрофорезу в гелі агарози і методом ПЛР у режимі реального часу.
Результати. У результаті було показано, що флавоноїди препарату Протефлазід і субстанції Протойл через 1 добу після інфікування вірусом грипу A/FM/1/47/H1N1 стимулюють експресію гена NrF-2 на рівні позитивного контролю.
Для того, щоб кількісно визначити рівень експресії гена NrF-2, був проведений експеримент з розтитруванням кДНК. У результаті проведених досліджень було показано, що рівень експресії гена Keap 1 миші через 1 добу після введення субстанції Протойл збільшується в 10 разів. Гіперекспресія гена Keap 1 спостерігається в легеневій тканині мишей, інфікованих вірусом грипу A/FM/1/47/H1N1, проте при введенні препаратів Протойл і Протефлазід відповідно per os і внутрішньоочеревинно рівень експресії гена Keap 1 зменшується в 10 разів.
При аналізі результатів експресії гена NrF-2, виявленого в легеневій тканині мишей, інфікованих та неінфікованих вірусом грипу, на 4-ту добу інфекції A/FM/1/47/H1N1 отримана та ж закономірність, проте рівень експресії NrF-2 в інфікованих вірусом грипу мишей, оброблених препаратами Протойл і Протефлазід, був різним. При обробці препаратом Протефлазід рівень експресії NrF-2 значно, у 10 разів, посилювався, а при введенні per os субстанції Протойл знижувався у 10 разів.
Друге дослідження було проведено на моделі коронавірусної інфекції трансмісивного гастроентериту свиней (ТГС) у культурі клітин Jurkat. Згідно з отриманими результатами, препарат Протойл у розведенні 1 : 2000 пригнічував експресію гена NrF-2, препарат Протефлазід не впливав на експресію гена NrF-2. Вірус ТГС викликав гіперекспресію гена NrF-2. В інфікованих ТГС клітинах Jurkat препарати Протефлазід і Протойл знижували суперекспресію гена NrF-2 до рівня NrF-2 в інтактних клітинах.
Висновки. Отже, дослідження щодо визначення впливу двох форм препаратів Протефлазід і Протойл з однаковим складом діючих флавоноїдів у різних розчинниках на двох моделях вірусів (грип і коронавірус ТГС) у двох системах in vivo та in vitro виявило як схожі закономірності, так і відмінності. До загальних закономірностей належить те, що виявлено гіперекспресію гена NrF-2 при вірусній інфекції грипу й коронавірусу як in vivo, так і in vitro. Важливим є те, що флавоноїди препаратів Протефлазід і субстанції Протойл в ефективній концентрації (ЕС50) пригнічують гіперекспресію гена NrF-2 в інфікованих вірусом грипу й коронавірусом до рівня експресії гена NrF-2 в інтактних клітинах.