Журнал «Медицина неотложных состояний» Том 18, №6, 2022
Вернуться к номеру
Оцінка вірулентного потенціалу штамів Blastocystis sp. за показниками рівнів утворення амебоїдних форм і протеазної активності
Авторы: Похил С.І. (1), Тимченко О.М. (1), Бодня І.П. (2)
(1) — ДУ «Інститут мікробіології та імунології ім. І.І. Мечникова НАМН України», м. Харків, Україна
(2) — Харківський національний медичний університет МОЗ України, м. Харків, Україна
Рубрики: Медицина неотложных состояний
Разделы: Медицинские форумы
Версия для печати
Вступ. За останні два десятиріччя досягнуто значних успіхів у вивченні вірулентного потенціалу Blastocystis sp. Варіювання рівня вірулентності пов’язують з утворенням клітин амебоїдної форми, які здатні ефективно прилипати до епітелію кишечника, впливати на його імунний гомеостаз і викликати захисну запальну реакцію. З точки зору технічної складності проведення досліджень для оцінки вірулентного потенціалу штамів Blastocystis sp. найбільш доступними (і загальновизнаними багатьма науковцями) є методи визначення інтенсивності утворення амебоїдних форм і протеазної активності цих паразитів.
Метою роботи було експериментальне обґрунтування визначення рівня вірулентного потенціалу культур Blastocystis sp. за показниками визначення відсотка утворюваних цими паразитами характерних амебоїдних морфологічних форм у культурі in vitro і рівня протеазної активності лізатів культур паразитів.
Матеріали та методи. Матеріалом для отримання штамів бластоцист слугували зразки фекалій (ЗФ) від людей (n = 12), серед яких 3 — від асимптоматичних і 9 — від симптоматичних осіб. В усіх ЗФ (нативних, без збагачення) визначали паразитарне навантаження як кількість клітин паразитів у полі зору мікроскопа (середня величина при перегляді 10 полів зору, світлова мікроскопія, загальне збільшення × 400 (мікроскоп «МИКМЕД-2» Ю-33.22.926, ВАТ «ЛОМО», РФ)) у мокрих мазках, забарвлених 1% розчином Люголя. Статистичну обробку даних експериментів проведено за допомогою програмного забезпечення IBM SPSS Statistics v.19.0. Відмінність середніх величин (М ± m) вважали статистично значущою при р < 0,05.
Результати. Аналіз даних окреслив наступні положення щодо діагностичної перспективності оцінки вірулентного потенціалу клінічних штамів Blastocystis sp. за показником рівня утворення амебоїдних форм. По-перше, при дослідженні ЗФ мікроскопічними методами досить складно виявляти/ідентифікувати амебоїдні форми Blastocystis sp., що обумовлює відносно низьку частоту таких знахідок навіть у ЗФ від симптоматичних осіб із помірною чи високою концентрацією Blastocystis sp. По-друге, крім підвищення частоти виявлення у ЗФ амебоїдних форм Blastocystis sp., використання культурального методу дозволяє визначати інтенсивність їх утворення конкретними штамами цих паразитів. У первинних культурах Blastocystis sp., вирощених із ЗФ від різних груп осіб з низьким рівнем паразитарної колонізації, амебоїдні форми цих найпростіших не спостерігаються (відносно частіше) або виявляються (відносно рідше) у низькому рівні, який, за результатами наших досліджень, не перевищує 3 %. Натомість у культурах Blastocystis sp., вирощених із ЗФ від симптоматичних осіб із помірною і високою концентрацією клітин паразитів, амебоїдні форми виявляються завжди, а їх відносна кількість у період пост–експоненційного росту (5-та доба) в усіх досліджених штамів Blastocystis sp. перевищувала 10 %. По-третє, хоча інтенсивність генерації амебоїдних форм конкретними штамами Blastocystis sp. певною мірою прямо корелює з наявністю і рівнем прояву інших факторів патогенності в цих паразитів, слід враховувати, що фактичне значення показника рівня вірулентності за інтенсивністю утворення амебоїдних форм (PAF) в одних і тих самих штамів Blastocystis sp. істотно варіює залежно від типу живильного середовища, використаного для їх вирощування.
Рівень протеазної активності (Ра) штамів Blastocystis sp. різного походження дозволяє сформулювати наступні положення щодо діагностичної перспективності оцінки вірулентного потенціалу клінічних штамів Blastocystis sp. за показником Pa лізатів їх клітин. По-перше, відтворення методу визначення рівня Pa є більш технологічно складним, праце- і матеріалозатратним, що в основному обумовлено необхідністю отримання стабілізованих, очищених ксенічних культур паразитів, поліетапністю проведення самої реакції розщеплення азоказеїну і потребою спеціального приладу для виміру інтенсивності поглинання (абсорбції) продуктів реакції при λ = 440–450 нм. По-друге, за величиною показника Ра виявлено виражену закономірність подібності й відмінності досліджених лізатів клітин, отриманих із штамів Blastocystis sp. різних груп. По-третє, в усіх досліджених групах штамів Blastocystis sp. різного походження спостерігається наявність прямої сильної позитивної кореляції між показниками рівнів утворення амебоїдних форм і протезної активності.
Висновки. 1. Проведена оцінка рівня вірулентності за інтенсивністю утворення амебоїдних форм і протеазною активністю 12 клінічних ізолятів Blastocystis sp. різного походження показала, що штамам, виділеним із ЗФ від симптоматичних осіб з помірною і високою вихідною концентрацією клітин паразитів, притаманні значимо вищі показники PAF (майже у 5 разів) і Ра (у 2 рази і більше) порівняно зі штамами, виділеними із ЗФ від асимптоматичних і симптоматичних осіб із низькою вихідною концентрацією клітин паразитів (р ≤ 0,05). Ознаками вірулентних штамів Blastocystis sp. запропоновано вважати рівні PAF > 10 % і Ра > 30 AU. 2. З урахуванням виявлених низки технічних переваг і прямої сильної позитивної кореляції між величинами показників PAF і Pа (яка у вірулентних ізолятів Blastocystis sp. сягає rPAF/Pa = +0,95) рекомендовано в медичній практиці оцінку вірулентного потенціалу клінічних штамів Blastocystis sp. проводити за показником PAF за наявності підозри щодо захворювання пацієнта на бластоцистоз і за умов негативного результату виявлення амебоїдних форм паразитів безпосередньо в його ЗФ із помірною концентрацією інших морфоформ Blastocystis sp. (> 2 клітини в полі зору), але нижчою за прийнятий критерій діагностично-значимої концентрації (≥ 5 клітин у полі зору).